Autores: et al , Cruz Aguilar Martha, Ortigoza Gutiérrez Sara, Alexander Aguilera Alfonso, Portilla Cardenas Maria Dora, Castañeda Hernández Roberto E., Ávalos Gómez Anabel, Lagunes Torres Teresa de Jesús
Introducción
Una colección microbiana se define como el conjunto de cepas viables, puras, ordenadas y clasificadas, mantenidas con los métodos más adecuados de conservación y preser- vación, su función principal es la conservación de cultivos microbianos para que se mantengan inalterables genéticamente y sin cambios morfológicos o fisiológicos (1). La selección de un método para conservar las cepas depende de los objetivos para los que se pretende mantener viable, así como también la inversión, el equipo y las instalaciones existentes, además debe garantizar la supervivencia de al menos el 70 % de las células por un período considerable de tiempo, de forma tal que la población sobreviviente sea igual a la original como sea posible en cuanto a características genotípicas y fenotípicas de la cepa. De igual manera reducir al mínimo el riesgo de contaminación y conservar la pureza del cultivo (2). Los métodos de conservación a corto plazo en agar inclinado con aceite mineral y con transferencias periódicas involucra el mantenimiento de cultivos hasta un año; este es el método utilizado tradicionalmente para la preservación de los microorganismos, consiste en cubrir el cultivo previamente desarrollado sobre medio nutritivo sólido con el aceite mineral no tóxico y estéril (parafina o vaselina), también se puede usar petrolato líquido. La conservación por métodos a mediano plazo incluyen: la conservación por suspensión en agua destilada estéril y papel filtro; son métodos con altos porcentajes de viabilidad bacteriana y de hongos filamentosos en períodos a veces superiores a cinco años, son métodos simples, económicos y seguros, capaces de garantizar la supervivencia de los cultivos evitando su contaminación (3).
Objetivo
Crear una colección microbiana de la Facultad de Bioanálisis, Región Veracruz, para el desarrollo de Docencia e Investigación dentro de la misma y de otras Instituciones interesadas en la ciencia y biotecnología que así lo requieran.
Material y Métodos
Desde el inicio de la creación de ésta colección microbiana, se recuperaron 139 cepas que incluyen bacterias, hongos y levaduras de aislados clínicos hospitalarios y diferentes colecciones microbianas Nacionales e Internacionales. Las cepas fueron recibidas y registradas con un número de ingreso, fueron refrigeradas entre 2° y 8° C y posteriormente propagadas en caldo BHI (Infusión Cerebro Corazón), se sembraron en medios selectivos y diferenciales e incubando de 18 – 24 hrs. a 37°C. Las cepas fueron sometidas a diferentes pruebas de identificación con examen en fresco, tinción de Gram, análisis de la morfología colonial y pruebas bioquímicas (4). La conservación en aceite mineral consistió en realizar una propagación en caldo BHI de las cepas puras identificadas y una vez desarrolladas fueron inoculadas sobre el medio sólido Agar Tripticasa soya e incubadas a 37°C de 18 – 24 hrs., transcurrido el tiempo, se adicionó el aceite mineral al tubo con medio inclinado y fueron mantenidas en refrigeración de 2° a 8°C debidamente etiquetada para su posterior identificación. La conservación en papel filtro consistió en resuspender las cepas debidamente verificadas en leche descremada al 1% y con ésta suspensión fueron impregnadas porciones circulares de 6 mm de papel filtro estéril y colocados en frascos color ámbar previamente esterilizados para finalmente colocarlos en un desecador para su almacenamiento. El papel filtro ofrece una matriz inherte que permite al microorganismo su estabilidad metabólica y genética. Para la conservación de levaduras y hongos, se sembraron las cepas puras en tubos con agar inclinado Dextrosa Sabouraud y se incubaron durante 48 hrs. (levaduras) y 72 hrs. (hongos filamentosos) a 35°C. Después del tiempo transcurrido al tubo inclinado que presentó desarrollo se le adicionó agua estéril realizando movimientos suaves para permitir el desprendimiento de las esporas para posteriormente llevarlas a tubos de polipropileno estériles, se etiquetaron y conservaron en refrigeración de 2° a 8°C.
Resultados
En la tabla 1 se muestra el total de cepas recuperadas y la clasificación de acuerdo a su respuesta a la tinción de Gram En la figura 1 se muestra el número de cepas conservadas por métodos a corto y mediano plazo.
Conclusiones
El total de cepas recuperadas fue de 139 de las cuales 39 de ellas fueron Bacterias Gram Positivas correspondiendo a un 28%, 85 fueron Gram Negativas con un 61%, 4 levaduras correspondieron al 3% y finalmente 11 hongos filamentosos con un 8%. Los métodos de conservación empleados para la colección microbiana corresponden a aceite mineral, papel filtro, arena de mar y agua destilada.
Palabras clave: Colección microbiana métodos de conservación.
2021-09-03 | 907 visitas | Evalua este artículo 0 valoraciones
Vol. 15 Núm.1. Enero-Junio 2020 Pags. 93-95 Rev Invest Cien Sal 2020; 15(1)