Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) casera para ADN de toxoplasma gondii:

estandarización 

Autores: Díaz María Lilia, Garcia L B, Muñoz S L, Vásquez A L.R., Dulcey I C

Completo

Introducción: La toxoplasmosis principal causa de abortos y malformaciones en fetos cuando se adquiere durante el embarazo. Produce encefalitis y retinitis en pacientes infectados por VIH e inmunosuprimidos por transplante de órganos. El diagnóstico de infección aguda y actividad de la enfermedad son de vital importancia para la conducta terapéutica. El PCR para ADN de Toxoplasma gondii. Es una buena alternativa. Este trabajo muestra la estandarización de un PCR identificar ADN del microorganismo. Metodología: Iniciadores Bl y B4, ADN de líquido peritoneal y biopsia de peritoneo de ratón suizo albino inoculado con Toxoplasma gondii. Se extrae con SDS y Proteinasa K y Cloroformo isoamílico, Para amplificación se ensayaron diferentes temperaturas de hibridización, número de ciclos, concentración de iniciadores y Taq. Polimerasa. Resultados: Mejor protocolo de amplificación; 30 pmoles de iniciadores, 5 (l de Buffer TE l0X, 5 (l de mezcla de dNTPs 2.5 mM, 7 (l de ClMg 25 mM, 0.5 (g de formamida, taq polimerasa 1U, 45 ciclos con Tº hibridización 54 ºC. Este protocolo mostró el fragmento de 174 pb esperado en la muestra positiva hasta con l ngr de ADN total y fue específico. Conclusión: Este PCR casero amplifica hasta 1 ngr de ADN de tejido infectado con toxoplasma específicamente. Se estudiara su utilidad en pacientes.

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2003-07-24   |   4,251 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 5 Núm.2. Abril-Junio 2001 Pags. . Infectio 2001; 5(2)