Desarrollo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para detección del Virus del Papiloma Humano (VPH)

Autores: Garcia L B, Bravo M, Díaz María Lilia, Muñoz S L

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Introducción: El CCU relacionado con VPH es segundo cáncer más común y causa principal de mortalidad femenina en países en desarrollo. La detección de VPH mediante PCR es, superior a la hibrid y hace posible tipificar el virus. Este trabajo muestra la estandarización del PCR en el laboratorio de Inmunología y Enfermedades Infecciosas de la Universidad del Cauca. Objetivos: Estandarizar una técnica de PCR casera para detectar VPH en biopsias cervicales parafinadas. Materiales y Métodos: Biopsia cervical uterina parafinada positiva para VPH histológicamente. Cultivo de células SiHa-HPV16 positivas para control positivo. Iniciadores GP5+:5´ y GP6+: Extracción de ADN con 3 protocolos: 1. Desparafinización con xilol y extracción con proteinasa K (PK). 2. Desparafinización y extracción con PK, precipitación con cloroformo-isoamílico. 3. Desparafinación y hervida a 95ºC por 10 min. Para amplificación se probó TAQ polimerasa (1.5, 1 y 0.5Uds) y diferente cantidad de oligonucleótidos iniciadores. Detección mediante electroforesis teñida con bromuro de etidio. Resultados: Los mejores resultados se obtuvieron con PK, cloroformo isoamílico, 25 pm de cada iniciador y 1 unidad de TAQ polimerasa por muestra. Conclusiones: Se estandarizó un PCR casero para ADN del VPH la cual produce mejores resultados mediante el tratamiento con PK y purificación con cloroformo-isoamílico.y amplificaión con 25 pmol de cada iniciador y 1 unidad de Taq polimerasa.

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2003-07-24   |   4,228 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 5 Núm.2. Abril-Junio 2001 Pags. . Infectio 2001; 5(2)