Resumen

En este artículo se describe un método alternativo para obtener cristales de albúmina sérica bovina en forma muy sencilla mediante la realización de solamente 2 pasos que se llevan a cabo en condiciones estériles: la desnaturalización diferencial de todas las proteínas plasmáticas excepto la albúmina, seguida de la precipitación de ésta con etanol frío al 60%. Este método se basa en la alta afinidad que posee la albúmina por moléculas pequeñas e hidrófobas que poseen cargas electrostáticas negativas, como por ejemplo el caprilato. Durante el proceso de desnaturalización diferencial a base de calor, la presencia de caprilato protege a la albúmina de la desnaturalización, ya que se une a esta molécula en el tercer dominio y contribuye a la precipitación del resto de las proteínas presentes en el suero, debido a que el caprilato es insoluble a pH de 4.2 al cual precipitan las globulinas. El método consiste en calentar el suero bovino a 70º C en presencia de caprilato, a un pH de 4.2, para desnaturalizar las globulinas. Al separar las globulinas precipitadas, la solución obtenida contiene a la albúmina libre de caprilato. Esta solución se enfría y más tarde se agrega al etanol frío hasta una concentración de 60%, a la cual la albúmina precipita. La albúmina se separa de la solución, se esparce en un cristalizador y se mantiene a –10º C por 72 horas y más tarde a 5º C hasta que seca. El análisis de los cristales por diferentes métodos muestra que éstos tienen características idénticas a las estándar de albúmina. Las pruebas biológicas muestran que la proteína aislada es activa en los ensayos desarrollados lo cual indica que no se desnaturalizó durante el proceso. El conjunto de datos indica que mediante este método se obtienen cristales con una pureza de 99% con un rendimiento de 26 g/L de suero en solamente 2 pasos: la desnaturalización diferencial y la precipitación con etanol al 60%.

Palabras clave: Albúmina sérica bovina cristales caprilato.

2004-05-20   |   4,590 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 22 Núm.2. Abril-Junio 1997 Pags. 660-664 Bioquimia 1997; 22(2)