Resumen

Objetivo: Sintetizar la proteína recombinante de la envoltura (Er) del virus peruano de la Fiebre Amarilla (FA) utilizando técnicas moleculares. Materiales y métodos: El gen de la proteína de interés fue amplificado por transcripción reversa - reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) y clonado en un vector plasmídico para ser analizado mediante secuenciamiento de ADN. El inserto de ADN fue subclonado en un vector de expresión para ser traducido a proteína. Se purificó la proteína mediante cromatografía de afinidad bajo condiciones denaturantes, siendo visualizada por electroforésis en SDS-PAGE. Resultados: Se sintetizó y purificó la pr E del virus de la FA. Presentó un peso de 66 kDa, y luego de tres horas de inducción a partir de 1x10⁸ células (OD = 0,5) se obtuvo 10 mg/mL de la proteína a miniescala. Conclusión: El análisis de la secuencia de aminoácidos demostró que Er podría ser un buen candidato a ser evaluado serológicamente y luego ser usado como herramienta de diagnóstico específico para la FA.

Palabras clave: Fiebre amarilla proteína aislamiento y purificación reacción en cadena por polimerasa de transcriptasa reversa.

2005-09-09   |   702 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 18 Núm.1. Enero-Junio 2001 Pags. 9-13 Rev Peru Med Exp Salud Publica 2001; 18(1-2)