Resumen

Objetivo: Validar un método para la detección directa de L. monocytogenes en leche cruda. Materiales y métodos: Se utilizó un procedimiento de extracción con el agente caotrópico Nal, para reducir la grasa en la muestra a un 0.2% p/v, el cual es más bajo límite de detección con el método de Gerber para evitar la polimerización. Las muestras de leche cruda fueron analizadas por el método estandar de oro para la detección de L. monocytogenes. La detección por PCR fue realizada amplificando el segmento específico de 938bp de 16S ADNr. Los siguientes cebadores fueron utilizados L1 (CTCCATAAAGGTGACCCT), U1 (CAGCMGCCGCGGTAATWC), LF (CAAACGTTAACAACGCAGTA) and LR (TCCAGAGTGATCGATGTTAA) que reconoce el gen hlyA de L. monocytogenes y que amplifica un fragmento de 750bp. Resultados: El ADN de 39 cepas evidenció una alta especificidad de la técnica ya que todas las 39 L. monocytogenes amplificaron los fragmentos de 938bp y 750bp especie específica. El límite de detección de la PCR fue de 10¹ CFU/ml. La reproducibilidad de la PCR mostró un Kappa de 0.85, la especificidad y sensibilidad fueron de 100%. El valor predictivo positivo y negativo fue de 100%. Conclusiones: Los resultados demostraron que es posible detectar Listeria spp usando cualquiera de los tres métodos ya que poseen la misma sensibilidad y especificidad. El 100% del valor predictivo positivo provee una alta posibilidad de detección en muestras positivas con listeria. El método de extracción y la PCR estandarizada permiten en 15 días detectar L. monocytogenes en leches crudas. La técnica de PCR puede ser adoptada y validada en otros tipos de alimentos como pollos, carnes y quesos.

Palabras clave: Listeria monocytogenes PCR validación leche cruda.

2007-01-18   |   3,599 visitas   |   1 valoraciones

Vol. 11 Núm.1. Enero-Junio 2006 Pags. 715-724 Rev MVZ Córdoba 2006; 11(1)