Resumen

El ensayo de competición es un método cinético que permite determinar si dos reacciones ocurren en uno o en diferentes sitios activos y establecer si dos reacciones son catalizadas por la misma o diferentes enzimas. Aquí se aplicó al estudio de la Uroporfirinógeno decarboxilasa, en preparaciones hepáticas de ratas normales o intoxicadas con hexaclorobenceno (HCB). El objetivo fue determinar el número de sitios activos en la enzima normal y ver el efecto del HCB in vivo sobre éste. Se realizaron curvas para elegir las concentraciones de referencia de los sustratos pentacarboxiporfirinógeno (PG) y uroporfirinógeno (UG). Las concentraciones usadas fueron 1,52 mM PG (1-p) y 3.21 mM UG (p) para la preparación normal y 4.15 mM PG (1-p) y 9.51 mM UG (p) para la preparación porfírica. En todos los casos v0 fue aprox. 2 nmoles de porfirinas/mg de proteína x 30 minutos. Los gráficos de competición sugieren que en la enzima normal existiría un único sitio activo, en tanto que en la porfírica existirían al menos dos, presentando inhibición cruzada, al ser ensayados con el primer y el último sustrato de la Uroporfirinógeno decarboxilasa, el Uro- y el pentacarboxi- porfirinógeno, respectivamente.

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2007-01-24   |   1,793 visitas   |   2 valoraciones

Vol. 2 Núm.1. Abril 2003 Pags. Qviva 2003; 2(1)