Resumen

El objetivo del presente trabajo fue: (1) investigar si la fuerte disminución de la actividad de la uroporfirinógeno decarboxilasa hepática (UroD) observada en porfiria cutanea tarda experimental se debe a una alteración de la proteína enzimática y (2) mejorar el conocimiento de la enzima hepática normal. Con este propósito se realizaron estudios fisicoquímicos de caracterización enzimática comparativamente entre la enzima proveniente de hígado de ratas normales (EN) y porfíricas por hexaclorobenceno (EP), con un grado de purificación de 12 veces. El estudio mostró que la EP tiene una mayor energía de activación, menor índice de reactividad y menor pH óptimo que la EN. Además, no alcanza la Vmax a ninguna de las concentraciones de sustrato ensayadas (hasta 28 mM de uroporfirinógeno III) mientras que la EN llegó a una meseta aproximadamente a 14 mM. La EP parece estar más protegida que la EN contra la acción inhibitoria de varios metales, particularmente Cu+2 y Pb+2, y contra la inactivación térmica. El Zn+2 no afectó la actividad mientras que Cu+2, Hg+2, Fe+2, Pb+2 y Cd+2 disminuyeron las actividades de ambas (EP y EN) en una forma dosis dependiente. Se vio también que a mayor radio atómico, de los metales en su forma hidratada, el efecto era menor. Ni GSH ni DTT alteraron significativamente la actividad enzimática, en el rango de concentraciones ensayadas. El bMercaptoetanol tubo efectos diversos que dependieron de la concentración ensayada y de la muestra enzimática empleada. Los ensayos con cistina mostraron un comportamiento dual tanto de EN como de EP. Los Western blots de ambas preparaciones revelaron una banda única (65 kDa) con similar intensidad. Este estudio mostró que el tratamiento con hexaclorobenceno modifica las propiedades fisicoquímicas de la UroD hepática produciendo una brusca caída en su actividad, si afectar su reactividad antigénica probablemente como consecuencia de cambios a nivel conformacional por la unión de su inhibidor, ya reportado.

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2007-01-31   |   1,026 visitas   |   1 valoraciones

Vol. 1 Núm.1. Abril 2002 Pags. Qviva 2002; 1(1)