Resumen

La cuantificación de la expresión génica mediante los métodos clásicos requiere de cantidades de RNAm difíciles de obtener cuando el número de muestras experimentales es limitado. Recientemente ha sido introducida una nueva tecnología que permite la cuantificación precisa de los amplicones durante cada ciclo del PCR (LightCyclerÔ; Roche). En este estudio hemos utilizado esta tecnología para analizar la expresión de algunos genes en ovocitos fetales de ratón en cultivo. Las reacciones de RT-PCR se llevaron a cabo a partir de lisados completos de ovocitos para evitar la pérdida de RNAm causada por su aislamiento. La amplificación de DNA genómico se previno mediante su digestión con DNAsa libre de RNAsas. La metodología empleada nos permitió la amplificación y cuantificación de RNAms con expresión alta (e.g. proteína ribosomal S16) y moderada (Cu/Zn superóxido dismutasa) a partir de sólo dos ovocitos. Para la amplificación y cuantificación de transcritos escasos (Metaxina) se requirió de un mínimo de ocho ovocitos. La amplificación por PCR usando esta metodología puede ser muy útil en el análisis de la expresión génica en condiciones en las que el material biológico disponible es muy limitado.

Palabras clave: Cuantificación de la expresión génica RT-PCR en tiempo real.

2003-01-14   |   1,507 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 27 Núm.1. Enero-Marzo 2002 Pags. 2-6. Bioquimia 2002; 27(1)