Resumen

Introducción: La entrada del rotavirus a la célula implica un mecanismo de múltiples pasos; las proteínas virales externas interaccionan con cuatro diferentes integrinas y Hsc70. Recientemente reportamos que la infección rotaviral disminuye cuando se bloquea la proteína disulfuro isomerasa de la superficie celular, sugiriendo su interacción con el rotavirus en el proceso de entrada. Objetivos: Establecer la interacción del rotavirus con la proteína disulfuro isomerasa en un sistema in vitro utilizando la proteína aislada de hígado bovino y en un sistema celular utilizando vellosidades intestinales de ratón y células MA104. Materiales y métodos: Se aisló la proteína disulfuro isomerasa a partir de un homogenizado de hígado bovino utilizando anticuerpos anti- proteína disulfuro isomerasa acoplados a agarosa mediante enlace hidrazona. La proteína disulfuro isomerasa purificada se examinó por SDS-PAGE y Western blot y fue utilizada para estudiar su interacción in vitro con rotavirus. Esta interacción se comparó con aquella observada en células MA104 y en las vellosidades intestinales de ratón. Resultados: La proteína disulfuro isomerasa purificada mostró homogeneidad electroforética y fue capaz de unirse a rotavirus en un sistema in vitro. La interacción proteína-rotavirus fue detectada por ELISA de captura usando la proteína disulfuro isomerasa bovina purificada y rotavirus de las cepas RRV y silvestre ECwt. La interacción de partículas rotavirales purificadas con la proteína disulfuro isomerasa celular se evidenció con ELISA, usando lisado celular después de la inoculación viral. Conclusión: La interacción rotavirus-proteína disulfuro isomerasa fue demostrada in vitro, en células MA104 y en vellosidades intestinales de ratón lactante.

Palabras clave: Rotavirus proteína disulfuro isomerasas receptores virales intestino delgado línea celular cromatografía de afinidad.

2011-07-29   |   756 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 31 Núm.1. Enero-Marzo 2011 Pags. 70-81 Biomédica 2011; 31(1)