Resumen

Introducción: La enfermedad de Hunter es un trastorno lisosómico caracterizado por la deficiencia de la enzima iduronato-2-sulfato sulfatasa (IDS) (EC 3.1.6.13). Esta enfermedad, al igual que muchos trastornos metabólicos, son patologías intratables mediante la terapéutica convencional; sin embargo, existe la posibilidad de ser tratada alternativamente mediante terapia génica o terapia de reemplazo enzimático. Objetivo: El Instituto de Errores lnnatos del Metabolismo (IEIM) ha desarrollado un sistema de expresion de sulfatasas para producir IDS humana recombinante (IDShr) en Escherichia coli y Pichia pastorfs, con resultados favorables. El objetivo principal de este trabajo fue desarrollar un sistema de detección de IDS humana recombinante. Materiales y métodos: Para el efecto, se inmunizaron con IDS comercial de TKT (Cambridge, MA) dos conejos de raza Nueva Zelanda blanca y los anticuerpos purificados a partir del suero se utilizaron en el desarrollo de una técnica semicuantitativa por dot-blot. Diferentes muestras de extractos crudos de fermentaciones con P. pastorfs y E. coli se procesaron con el fin de poder determinar la presencia de la enzima. Resultados: Se demostró que los anticuerpos eran específicos en el reconocimiento de la IDS sin presentar reactividad cruzada con proteínas contaminantes de los extractos crudos. Conclusion: Por consiguiente, los anticuerpos se podrán usar en el desarrollo de una técnica ELISA tipo sandwich como método de detección y cuantificación de la enzima y en procesos de purificación de la misma mediante cromatografía de afinidad.

Palabras clave: Mucopolisacaridosis I iduronato sulfatasa síndrome de Hunter terapia de reemplazo enzimático anticuerpos policlonales dot-blot anticuerpos policlonales.

2012-03-31   |   461 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 25 Núm.2. Abril-Junio 2005 Pags. 181-188 Biomédica 2005; 25(2)