Resumen

Objetivo: Desarrollar un ensayo para medir simultáneamente la proliferación celular, la viabilidad y marcadores de la superficie de la membrana en dos colores en poblaciones de células hematopoyéticas o de otro tipo utilizando la citometría de flujo. Métodos: Células mononucleares de sangre periférica criopreservadas de donantes sanos fueron teñidas con CFDA-SE, 7-ADD y dos marcadores específicos de superficie de membrana de acuerdo a la naturaleza de las células analizadas. La simulación se llevó a cabo recubriendo 96 bandejas de fondo plano durante una noche con estimulación anti-CD3/anti-CD28 y teñidas con el marcador CFSE de proliferación celular y cultivadas hasta por 12 días. Las muestras fueron analizadas por medio de citometría de flujo en un citómetro de flujo Beckman Coulter FC500. Resultados: Una concentración adecuada de 2.5 mM de CFSE en cuanto a su baja toxicidad y adecuada intensidad para un citómetro de flujo Beckman Coulter FC500. Hasta 7 picos (divisiones celulares) y 18 días de seguimiento fue optimizado en nuestro laboratorio. El MFI en las muestras teñidas CFSE en células estimuladas y no estimuladas, se volvieron estables después del quinto día. Las células tienen 84% de viabilidad después de tres días en cultivo. Una adecuada elección de fluorocromos son ECD y PECy7 para combinarse con CFSE. Conclusiones: Las aplicaciones de este estudio son múltiples, van desde hematológicas, inmunológicas y diversos análisis de características de poblaciones celulares, en las cuáles el estudio de la proliferación y la viabilidad se necesita.

Palabras clave: Flow cytometry CFSE proliferation viability 7-AAD surface markers

2012-08-15   |   661 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 13 Núm.53. Octubre-Diciembre 2011 Pags. 183-192 Med Univer 2011; 13(53)