Resumen

Introducción: Los niveles de ADN viral en muestras de suero son un marcador útil para monitorear la progresión de la enfermedad y la respuesta al tratamiento en pacientes con hepatitis B crónica; de ahí que se comercialicen estuches diagnósticos para esta función, con la desventaja de ser costosos. Objetivos: Desarrollar y evaluar el desempeño analítico de un sistema de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B. Métodos: Se utilizaron cebadores que amplifican un fragmento del gen C y sonda de hidrólisis en el equipo LightCycler 1.5. Se construyó una curva estándar y se evaluó su eficiencia. Se utilizaron 272 muestras de suero para ensayos de especificidad analítica y clínica, especificidad y exactitud genotípica, coeficientes de variación intraensayo e interensayo, comparación con un estuche comercial y con la reacción en cadena de la polimerasa cualitativa para el virus de la hepatitis B. Resultados: La curva estándar mostró excelente correlación lineal (r= -1) y valores muy bajos de error a lo largo de varias magnitudes de concentración de ADN diana. La especificidad analítica y clínica fue de 100%, en tanto que al evaluar la especificidad y exactitud genotípica, se obtuvo que las diferencias entre los Log₁₀ del valor obtenido y el de referencia eran inferiores a 0,5 Log₁₀. El límite de detección por análisis de Probit se estimó en 16,41 UI/μL con un rango dinámico de cuantificación de hasta 10⁸ UI/mL. El sistema mostró bajos coeficientes de variación intraensayo (0,16 a 1,45%) e interensayo (0,9 a 2,62%). La comparación con el estuche comercial artus HBV LC PCR kit mostró una correlación de r = 0,964 y r² = 0,929; con la reacción en cadena de la polimerasa cualitativa se confirmó la mayor sensibilidad y ventajas de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. Conclusiones: el ensayo cumple con los requisitos para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B, que demuestra ser específico, sensible y reproducible. Su aplicación permitirá un mejor diagnóstico y seguimiento de los pacientes con hepatitis B crónica en Cuba.

Palabras clave: Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real hepatitis B cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B estandarización de sistemas diagnósticos.

2012-09-07   |   649 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 64 Núm.3. Septiembre-Diciembre 2012 Pags. 290-303 Rev Cubana Med Trop 2012; 64(3)