Resumen

Introducción: Los anticuerpos anti-ADN doble cadena son un marcador serológico diagnóstico de lupus eritematoso sistémico (LES). El ensayo inmunoenzimático en fase sólida es una técnica rápida y rentable para su detección. Objetivo: Estandarizar un ELISA que detecte anti ADN doble cadena para el diagnóstico del lupus. Métodos: Los pasos que se siguieron para la estandarización incluyeron la preparación de controles, la sensibilización de la fase sólida, la selección de los amortiguadores y conjugado del ensayo, la evaluación de las condiciones de reacción y la determinación del nivel de corte. Además se realizó el estudio de inespecificidades. Se probaron 5 tipos de placas de poliestireno y se compararon ADN plasmídico de E.coli, pUC19 y ADN genómico humano como antígenos de recubrimiento. Se evaluó el efecto de la poli-L-lisina y la irradiación de la placa con luz ultravioleta, en la fijación del antígeno. El valor de corte del ensayo se determinó por el método del valor límite. Resultados: Se observó disociación del antígeno cuando no se utilizó poli-L-lisina en el pretratamiento de la placa y la irradiación con luz UV no favoreció la unión del ADN a la fase sólida. No se encontraron diferencias significativas (p=0.710) entre ambos ADN, en el recubrimiento. El valor de corte (K=3) permitió clasificar como positivas 28 muestras (63.6%) de pacientes con LES. Conclusiones: El método estandarizado, con el empleo de ADN plasmídico, permitió la detección de anticuerpos anti-ADN doble cadena en pacientes con lupus.

Palabras clave: ADN ensayos inmunoenzimáticos ELISA estandarización.

2013-02-05   |   611 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 31 Núm.4. Octubre-Diciembre 2012 Pags. Rev Cubana Invest Biomed 2012; 31(4)